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West Femto ECL超敏發光液 PE0030
物品單位 價格 品牌
700 Solarbio
  • 產地:北京
  • 貨號:PE0030
  • 發布日期: 2020-04-16
  • 更新日期: 2020-04-16
產品詳細說明
產地 北京
品牌 Solarbio
貨號 PE0030
用途 West Femto ECL超敏發光液用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關聯的抗原。由于采用了獨特的發光底物系統
產品規格 2*12.5ml
CAS編號
純度 >99%%
是否進口

West Femto ECL超敏發光液用于檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關聯的抗原。由于采用了獨特的發光底物系統,West Femto ECL超敏發光液是目前最靈敏的商業化熒光ECL檢測試劑:
(1) 具有極高靈敏度和高信噪比,可檢測10~100 fg抗原;
(2) 可在日光燈下進行發光操作;
(3) 發光迅速,熒光可使X光膠片感光達12小時以上,特別適用于痕量蛋白或核酸檢測;
(4) 可使用更高的抗體稀釋倍數(1:2000~1:10000),極其節省抗體。
2. 用途:用于HRP標記抗體的Western Blot和HRP標記探針的核酸雜交。
3. 使用方法:
(1)執行常規SDS-PAGE、轉膜和Western Blot步驟。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。
(2)Western Blot*一次洗膜的同時新鮮配制發光工作液:分別取等體積的溶液A和B,放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液,室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
(3)用鑷子取出膜,搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜完全干燥。將膜完全浸入發光工作液(0.125mL發光工作液/cm2膜)中,與發光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘,準備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度,有時還會導致曝光條帶異常。發光過程的本質是酶促反應,使用過少的發光工作液不利反應進行,也會導致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達節約目的可將膜剪小但勿降低發光液用量。
(4)用鑷子夾起膜,搭在濾紙上瀝干發光工作液。但勿洗去發光液。
(5)打開X光膠片暗盒,在暗盒內表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上,將保鮮膜折起來完全包裹Western Blot膜,去除氣泡和皺褶,可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內,蛋白帶面向上。
(6)暗房內壓X光膠片,分別曝光不同的時間如數秒到數分鐘。顯影沖洗。
4. 儲存:4  oC密封避光保存一年以上。短期可放置室溫。
5. 安全性:無特殊毒性,按普通化學品處理。
6. 注意事項:
(1)步驟1~5可在日光燈下操作;但發光液曝露于強光下時間過久靈敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
(2)長時間曝光或蛋白過量,將加深背景并使條帶強弱變化失去線性關系。曝光不足則條帶模糊。
(3)發光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發光。強條帶發光在暗房中肉眼可見,低豐度蛋白條帶發光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發光時間。肉眼不可見的熒光實際上可持續數小時并使X光膠片感光,因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳,可用洗膜緩沖液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL發光和曝光。
(4)由于超敏發光液極其靈敏,強烈推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗1:1000~1:4000,二抗1:2000~1:5000??贵w濃度過高將造成高背景或沒有條帶,導致失敗。
(5)某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光,應選擇高質量保鮮膜。
(6)使用肉眼可見的預染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。

(7)NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗體應避免使用NaN3,如必需使用勿超過0.01%。




參考文獻:

《IL‐37 inhibits invasion and metastasis in non‐small cell lung cancer by suppressing the IL‐6/STAT3 signaling pathway》 作者:Mingfang Jiang,  Ye Wang,  Hua Zhang,  Youxin Ji,  Peng Zhao,  Rongli Sun,  Chunling Zhang 期刊:Thoracic Cancer 影響因子:2.569 PMID:29575809


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